باکتری شناسی5
باکتری شناسی5
انتقال DNA تا مهندس ژنتیک
تست: روش انتقال DNA در کانژوگاسیون بین دو باکتری کدام یک از گزینه های زیر است؟
الف) Rolling circle ب) replicating form
ج) lysogen conversion د) هیچکدام
پاسخ: گزینه الف
همانطور که در شکل کتاب جاوتز مشخص است ولی ذکر نشده است این روش انتقال با نام روش دایره غلتان یا چرخ غلتان است. پس از نزديک شدن دو باکتری، باکتری F+ با استفاده از پيلی جنسی و انقباض پيلی ها به باکتری F- متصل می شود. سپس سوراخی در محل تماس دو باکتری ايجاد شده و انتقال پلاسميد از محل شکافی در زنجيره مفرد oriT آغاز می شود. شکاف در اثر عملکردهای tra (transfer) کنترل می شود. انتهای ′5 در يک رشته پلاسميد از طريق منفذ ايجاد شده به سلول پذيرنده F- منتقل می شود و اين در حالی است که سنتز DNA از سمت 3′ - OH از شکاف OriT آغاز شده است. توجه کنيد که در زمان انتقال فقط يک رشته منتقل می شود و اين رشته نيز در زمان انتقال سنتز می شود.
تست: جزایر بیماریزایی توسط کدام روش انتقال می یابند؟
الف) conjugation ب) transduction
ج) Transformation د) Transfection
پاسخ: گزینه ب
جزایر بیماریزایی توسط روش ترانسداکشن انتقال می یابد.
تست: اگر یک اسید آمینه در جریان جهش به اسید آمینه دیگری تبدیل شود که در فنوتیپ موثر نباشد، این تغییر چه نوع جهشی محسوب می شود؟
الف) missense mutations ب) Nonsense mutations
ج) Frameshift mutations د) genotypic reversion
پاسخ: گزینه الف
نتايج حاصل از موتاسيون
موتاسيون اشتباه (missense mutation) :
موتاسيونی که کدون يک اسيدآمينه به کدون اسيدآمينه ديگری تغيير می کند. چنانچه اين تغيير در باز سوم روی دهد موجب ايجاد موتاسيون خاموش (silent mutation) می شود که تغييری ديده نمی شود.
موتاسيون بی معنی یا پوچ (nonsens mutation) :
موتاسيونی که در آن سنتز زنجيره پلی پپتيد متوقف می شود و در واقع کدون توقف (stop signal) به وجود می آيد که در موتاسيون های ترانزيسيون يا ترانس ورسيون بروز پيدا می کند.
موتاسيون تغيير در قالب (Frameshift mutation) :
به علت حذف و اضافه شدن بازها در صورتی که مضربی از سه نباشد قالب اصلی خواندن ژن تغيير می کند و توالی های تصادفی ايجاد می شود که پروتئين های حاصل شباهتی به پروتئين سويه وحشی ندارند. پاسخ صحیح گزینه الف می باشد.
تست: افزایش یا کاهش یک باز در ملکول DNA منجر به کدام موتاسیون می شود؟ ( کارشناسی ارشد میکروب شناسی وزارت بهداشت 82 – 81 )
الف) Frameshift ب) Rearrangement
ج) Point د) Substitutive
پاسخ: گزینه الف
رجوع به پاسخ تست قبل شود.
تست: در اپران تریپتوفان، محل attenutor در کدام قسمت است؟
الف) بین ژن های ساختاری trpE و trpL ب) بین trpL و اپراتور
ج) بین ژن های ساختاری trpE و trpA د) بین پروموتور و اپراتور
پاسخ: گزینه الف
تست: نقش اتیدیوم بروماید در کارهای مولکولی در کدام گزینه نشان داده شده است؟
الف) جهت افزایش بار قطعات پروتئین در ژل الکتروفورز
ب) جهت تولید رنگ با اتصال به قطعات DNA
ج) جهت ایجاد برش بر روی زنجیره های DNA
د) جهت ایجاد حرکت سریع پروتئین ها در میدان الکتریکی
پاسخ: گزینه ب
اتیدیوم بروماید(EtBr ) ، ماده شیمیایی است که در رنگ آمیزی DNA در عملیات الکتروفورز استفاده می شود . در حالت عادی بدون رنگ آمیزی با اتیدیوم بروماید امکان مشاهده DNA بروی ژل وجود ندارد. EtBr دارای بار مولکولی مثبت بوده و یک رنگ کاتیونی به حساب می آید، یعنی بر روی آن شارژ مثبت وجود دارد و در بین جفت بازهای DNA قرار می گیرد .خاصیت این ماده اینست که با نور ماوراء بنفش بر انگیخته شده و از خود نور نارنجی- قرمز تولید می کند . این موضوع به ما کمک می کند تا حضور و تجمع DNA را در یک نقطه شناسایی کنیم.
تست: کدام یک از روش های شناسایی DNA به نام روش دی دزوکسی نیز موسوم است؟
الف) southern ب) maxam- gilbert
ج) northen د) Sanger
پاسخ: گزینه ب
روش سانجر: سانجر دانشمندی بود که علاوه بر پروتئین ها، DNA را نیز تعیین توالی کرد و جایزه نوبل دریافت کرد. در این روش از دی دزوکسی ریبوز به جای دزوکسی ریبوز استفاده می کنند. برای اضافه کردن نوکلئوتیدها به رشته وجود 3′-OH ضروری است. در این روش 3′ – OH با H جایگزین شده و نوکلئوتید بعدی نمی تواند به این قند متصل شود. از چهار لوله که هر کدام حاوی مقداری پرایمر، قطعه کلینو DNA پلی مراز I و مقادیر مساوی از چهار نوکلئوتید dTTP، dATP ، dCTP و dGTP قرار دارد. به ترتیب به چهار لوله یکی از نوکلئوتیدهای دی دزوکسی ddTTP، ddATP ، ddCTP و ddGTP اضافه کرده که مقدار آن یک دهم بازهای دزوکسی ریبوز است و بعد الکتروورز می کنیم. سپس یک فیلم عکاسی را روی ژل قرار داده و آنرا می خوانیم در این روش برعکس روش ماکسام و گیلبرت باید از پایین به بالا ژل خوانده شود. از روش ساترن بلاتینگ برای DNA ، روش وسترن برای پروتئین ها با آنتی بادی های نشاندار و روش نورترن بلاتینگ برای شناسایی RNA استفاده می شود.
تست: در کدام یک از تکنیک های مولکولی می توان مقدار محصولات را در پایان هر چرخه اندازه گیری کرد؟
الف) RFLP ب) Real Time PCR
ج) Rapid PCR د) nest PCR
پاسخ: گزینه ب
Real Time PCR روشی است که می توان در پایان هر چرخه امپلیکون ها را اندازه گیری کرد. در این روش PCR از مولکول گزارشگر(Reporter) مانند سایبرگرین استفاده می شود و به DNA دو رشته ای باند شده و با جذب ول موج 498 نانومتر نوری 522 نانومتری را ساطع می کند که توسط دستگاه ثبت می شود.
تالیف و پاسخ دهی: دکتر سید مجتبی کشفی
منبع پیشنهادی:
ضروریات بیولوژی سلولی و مولکولی
موسی بهری - دکتر جوادمحمدنژاد
ناشر: انتشارات آناطب
با همکاری: دکتر کشفی
